در این راهنما نحوه ایجاد یک منحنی استاندارد خطی را با استفاده از مایکروسافت اکسل و نحوه استفاده از آن برای محاسبه مقادیر نمونه ناشناخته توضیح خواهم داد. من از استانداردهای سنجش پروتئین کل BCA به عنوان نمونه استفاده خواهم کرد.
مجموعه داده
برای ایجاد یک منحنی استاندارد در مایکروسافت اکسل ، دو متغیر داده مورد نیاز است. یک مجموعه از داده ها باید متغیر مستقل باشد ، که مقادیر شناخته شده (به عنوان مثال غلظت استاندارد پروتئین در یک روش BCA) است ، و دیگری متغیر وابسته است که به مقادیر اندازه گیری شده (به عنوان مثال قرائت چگالی نوری نمونه ها) اشاره دارد. داده های مستقل بر روی محور x ترسیم شده است ، در حالی که داده های وابسته بر روی محور y ، در یک نقشه پراکنده ترسیم می شوند.
برای این مثال ، من از داده های تولید شده از کیت سنجش پروتئین BCA برای برآورد غلظت پروتئین کل استفاده خواهم کرد. برای ایجاد منحنی استاندارد ، میزان جذب 8 استاندارد (25 ، 125 ، 250 ، 500 ، 750 ، 1000 ، 1500 و 2000 میکروگرم در میلی لیتر پروتئین) و یک نمونه خالی (0 میکروگرم در میلی لیتر پروتئین کل) برای پس زمینه اندازه گیری کرده ام. اصلاحاتدر اینجا داده ها وجود دارد:
آنچه ما در اینجا داریم متوسط جذب هر استاندارد در کنار غلظت های شناخته شده مربوطه است. در این مثال ، قبل از اینکه بتوانیم شروع کنیم ، ابتدا باید داده ها را برای سر و صدای پس زمینه اصلاح کنیم.
برای انجام این کار ، به سادگی مقادیر جذب متوسط را از میانگین مقدار جذب خالی - بنابراین 0. 0945 ‘. با این کار مقادیر جذب تصحیح شده در پس زمینه ارائه می شود. من این کار را در زیر انجام داده ام و ستون را ‘جذب (562 نانومتر) نامیده ام:
شما می دانید که آیا این کار را به درستی انجام داده اید ، زیرا نمونه پس زمینه اصلاح شده شما اکنون باید ‘0 را بخوانید. ستون انتهایی را در تصویر بالا مشاهده کنید.
ایجاد یک منحنی استاندارد خطی در مایکروسافت اکسل
اکنون داده ها برای ایجاد یک منحنی استاندارد در اکسل خوب است. برای انجام این کار ساده تر است که ابتدا یک نقشه پراکندگی بین مقادیر شناخته شده (standard استاندارد پروتئین) و مقادیر جذب تصحیح شده پس زمینه (‘جذب‘) ترسیم کنید.
- Select the two columns in Excel. To select more than one column in Excel, hold down the ‘ ctrl ‘ key while you click and drag the mouse over the data. Then go to, ‘ Insert >Scatter ‘و گزینه اول (‘ Scatter ‘) را انتخاب کنید.
2. Hopefully a scatter plot will now be displayed. We next need to create a line of best fit through each of the points in the graph to create the standard curve. For this example I will add a linear line to the graph, however, this doesn’t always have to be linear. To do this, ensure the graph is selected and go to ‘ Design > Add Chart Element > Trendline >خطی ‘
نمودار شما اکنون باید یک خطی (خط مستقیم) داشته باشد که از طریق آن اجرا شود. امیدوارم که از بیشتر نکات شما عبور کند.
3. برای درک اینکه خط خطی چقدر به داده ها متناسب است ، غالباً مفید است که بدانید مقدار ‘R 2‘ خط چیست. به سادگی ، ‘R 2‘ به ضریب تعیین اشاره دارد که نشان دهنده نسبت واریانس برای متغیر وابسته است که توسط متغیر مستقل پیش بینی می شود. مقادیر R 2 از 0 تا 1 متغیر است ، با 1 نشان دهنده تناسب کامل با داده ها و 0 خوب بودن مناسب نیست. همچنین ممکن است از مقدار R 2 به عنوان درصد فکر کنید ، از 0 ٪ تا 100 ٪.
To display this on the graph, firstly ensure the graph is selected and go to ‘ Design > Add Chart Element > Trendline >گزینه های ترندر بیشتر ... ‘. یک منهای جانبی جدید اکنون باید در سمت راست به نام ‘Format Trendline‘ ظاهر شود. اکنون ، در این فهرست به پایین بروید تا زمانی که مقدار ‘Display R-Squared را در گزینه نمودار مشاهده کنید. اگر این را تیک بزنید ، مقدار R 2 به نمودار اضافه می شود.
می بینید که ‘r 2‘ به عنوان مثال 0. 9996 ‘است. این نشان می دهد که مقادیر جذب اندازه گیری شده بسیار شبیه به مقادیر مورد انتظار (تولید شده توسط خط خطی) است. از طرف دیگر ، نتایج را می توان 99. 96 ٪ از واریانس که توسط خط خطی توضیح داده می شود ، تفسیر کرد.
4- علاوه بر این ، بخش دیگری از اطلاعاتی که برای هر منحنی استاندارد مورد نیاز است معادله خط است. این امر می تواند برای محاسبه نمونه های ناشناخته ، بر اساس منحنی استاندارد استفاده شود. بنابراین ، در مثال بالا از معادله می توان برای استفاده از غلظت پروتئین کل نمونه های ناشناخته استفاده کرد.
برای نمایش معادله ، معادله ‘Display را در گزینه نمودار (دقیقاً بالاتر از مقدار‘ Display R-Squared در نمودار ‘) در فهرست‘ Format Trendline ‘قرار دهید. در مثال فوق ، معادله خط ‘y = 0. 0009x + 0. 0017 stare است. به موجب آن ، 0. 0009 پوند ‘به شیب (شیب) خط و‘ 0. 0017 ‘اشاره دارد که نشان دهنده رهگیری خط یعنی نقطه ای است که در آن از محور y عبور می کند.
در زیر ، نحوه استفاده از این معادله را برای محاسبه مقادیر نمونه های ناشناخته بر اساس منحنی استاندارد تولید شده توضیح خواهم داد.
با استفاده از معادله خط برای محاسبه مقادیر نمونه ناشناخته
بنابراین شما اکنون معادله خط را دارید. برای تعیین مقادیر ناشناخته بر اساس این امر ، بنابراین در این مثال می توان از مقادیر جذب تصحیح شده در پس زمینه برای نمونه های ناشناخته ("y") استفاده کرد تا غلظت پروتئین کل ('X') را انجام دهید ، شما باید معادله را دوباره سازماندهی کنیدبرای تعیین "x". بیایید این کار را در مثال انجام دهیم:
اکنون فقط می توانید از معادله تنظیم مجدد برای وارد کردن مقادیر ‘y استفاده کنید تا بتوانید‘ x ‘کار کنید. به عنوان مثال ، بیایید بگوییم ما نمونه ای داریم که غلظت پروتئین کل را نمی دانیم. ما میزان جذب نمونه را در 562 نانومتر اندازه گیری می کنیم و مقدار پس زمینه را کم می کنیم تا سیگنال پس زمینه را به خود اختصاص دهیم. نمونه دارای جذب پس زمینه اصلاح شده از 0. 497 پوند است. این مقدار ‘y ما در معادله خواهد بود. ورود به این امر:
بنابراین ، غلظت پروتئین کل برای نمونه ناشناخته 550. 33 میکروگرم بر میلی لیتر است.
میانبرهایی برای محاسبه R 2 و معادله خط
برای کسانی که می خواهند یک روش سریع برای تعیین R 2 و معادله خط بدون ترسیم یک طرح پراکندگی ، می توانید از فرمول در مایکروسافت اکسل استفاده کنید تا این موضوع را برای شما برگرداند.
برای کار کردن R 2 با استفاده از فرمول اکسل ، موارد زیر را در یک سلول وارد کنید:
مقادیر ‘y‘ و ‘X را با داده های خود جایگزین کرده و به کلید" Enter "ضربه بزنید.
معادله خط
برای استفاده از شیب خط مستقیم با استفاده از فرمول اکسل ، موارد زیر را در یک سلول وارد کنید:
مقادیر ‘y‘ و ‘X را با داده های خود جایگزین کرده و به کلید" Enter "ضربه بزنید.
برای استفاده از خط مستقیم با استفاده از فرمول اکسل ، موارد زیر را در یک سلول وارد کنید:
مقادیر ‘y‘ و ‘X را با داده های خود جایگزین کرده و به کلید" Enter "ضربه بزنید.
نسخه Microsoft Excel استفاده شده: 2016
استیون بنیانگذار Top Tip Bio است. وی در حال حاضر نویسنده پزشکی و همکار سابق تحقیقات پس از دکتری است. از آموزش لذت بردید؟سپس با ترک نظر در زیر به من اطلاع دهید ، یا یک قهوه برای من خریداری کنید.
